電腦軟件推薦： Xmind Zen 2020免激活版 (已驗證可用) vmPing v1.3.21 綠色中文版 同花順遠航版 v7.9.3.1 官方版本 Windows Firewall Control v6.0.2.0

FlowJo 是一款專門用于流式細胞分析的軟件，兼容幾乎所有流式細胞儀的數(shù)據(jù)，能夠通過圖像分析細胞的各種特征和變化。FlowJo 的用戶界面友好且功能強大，提供了豐富的二維圖表來進行系統(tǒng)分析，以幫助用戶輕松監(jiān)測細胞狀態(tài)的變化。該軟件配備了流動室、液流驅(qū)動系統(tǒng)、光電轉(zhuǎn)換器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等先進科技。

FlowJo功能

1. 單標樣本

對于單標記樣本，常用的數(shù)據(jù)顯示方式是單參數(shù)直方圖。通常情況下，橫坐標表示檢測的熒光或散射光的強度，可以設置為線性或?qū)?shù)標度；縱坐標則表示在特定熒光強度下的細胞數(shù)量，有時也會以相對百分比的形式顯示。

例如，分析3 color comp 文件夾中的CyPE comp.fcs數(shù)據(jù)。將該文件夾拖到FlowJo的組空間中。

在組空間中選擇“3 color comp”組，所有樣本將會在樣本空間中顯示。然后雙擊“Cy5PE comp.fcs”，打開圖形窗口。

在此二維點圖中，X軸選擇SSC（側向散射，細胞內(nèi)部顆粒結構越復雜，SSC值越大）；Y軸選擇FSC（前向散射，細胞越大，F(xiàn)SC值越大）。

使用設門工具（矩形門、橢圓門、多邊形門、自動門）中的任意一個，在二維點圖中選擇淋巴細胞。

在圖形窗口中雙擊選中的淋巴細胞，將生成新的圖形窗口。X軸選擇Cy5PE:CD4，Y軸選擇Histogram，使用設門工具（區(qū)域門、雙分門）中的任意一個在單參數(shù)直方圖中設置門。

2. 多色標樣本

多色標記樣本包括雙標記、三標記等。橫坐標和縱坐標分別代表與細胞相關的兩個獨立參數(shù)，每個平面上的點表示具有相應坐標值的細胞。

以三標記樣本為例，分析3-color-experiment文件夾中的931115-B02-Sample01.FCS數(shù)據(jù)。雙擊樣本以打開圖形窗口，顯示為二維點圖。X軸選擇FSC，Y軸選擇SSC。接著使用多邊形設門工具，在二維點圖中選擇淋巴細胞。

雙擊淋巴細胞門，打開圖形窗口，X軸選擇Fluor::CD3，Y軸選擇FSC。使用矩形設門工具選中CD3陽性細胞，并將其命名為T細胞。

再次雙擊T細胞門，出現(xiàn)圖形窗口，X軸選擇Cy5PE::CD4，Y軸選擇PhyEry::CD8，使用十字門工具進行設門（拖動鼠標調(diào)整四分門位置，通常設置在陰性和陽性細胞的分界處），如下圖所示：

Q1：CD8單陽性細胞，即CD8+ T細胞

Q2：雙陽性細胞

Q3：CD4單陽性細胞，即CD4+ T細胞

Q4：雙陰性細胞

3. 細胞凋亡

拖入凋亡樣本，雙擊打開圖形窗口，X軸選擇FSC-A，Y軸選擇SSC-A。選擇上圖所示的細胞群體進行凋亡分析，細胞碎片不予分析。

在SSC/FSC圖中雙擊“分析的細胞群體”，X軸選擇FITC以表示AnnexinV-FITC，Y軸選擇PE-Texas以表示PI。使用四分門工具界定活細胞和凋亡細胞，如下圖所示：

Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI+，此區(qū)域的細胞為壞死細胞，也可能包含一些晚期凋亡細胞和機械損傷細胞。

Q2: (AnnexinV+FITC)+/PI+，此區(qū)域的細胞為晚期凋亡細胞。

Q3：(AnnexinV-FITC)+/PI-，此區(qū)域的細胞為早期凋亡細胞。

Q4：(AnnexinV-FITC)-/PI-，此區(qū)域的細胞為活細胞。

通常統(tǒng)計細胞凋亡率時，計算Q2+Q3，即晚期凋亡加早期凋亡細胞群（即所有AnnexinV陽性群）。

4. 細胞周期

細胞周期檢測是流式細胞儀的一項重要應用，指的是細胞從親代分裂完成到子細胞分裂結束所經(jīng)歷的過程。細胞周期包括G1期、S期、G2期和M期。細胞在G1期完成生長和物質(zhì)準備，在S期完成DNA的復制，在G2期進行檢查和修復，以確保DNA復制的準確性，最后在M期進行分裂。

在細胞周期檢測中，PI（碘化丙啶）作為一種常用的染料，通過嵌入DNA和RNA雙鏈之間來標記細胞，其結合量與DNA含量成正比。使用流式細胞儀進行分析，可以得到各個周期階段的DNA分布狀態(tài)，并計算每個階段的百分比。

以cell cycle 文件夾中的5206.001 PI標記數(shù)據(jù)為例，選擇目標細胞群體并排除細胞碎片。雙擊5206.001樣本，打開圖形窗口。X軸選擇FSC-H，Y軸選擇SSC-H，細胞碎片位于左下角，設門選中目標細胞，如下圖：

選擇要進行細胞周期分析的單細胞群體，排除粘連細胞的影響。X軸選擇FL2-W（寬度），Y軸選擇FL2-A（面積），設門方式如下圖所示：

對于BD流式儀采集的數(shù)據(jù)，通常使用FL2-A與FL2-W（或FL2-A與FL2H）進行設門。

對于Beckman流式儀采集的數(shù)據(jù)，X軸選擇FL3-LIN來表示PI的線性信號，Y軸選擇FL3-PEAK來表示PI的峰值信號，設門方式如下圖：

在FlowJo工作臺中選擇“單細胞群體”節(jié)點，點擊菜單欄中的“工具”，選擇“細胞周期”，打開周期分析窗口。得到G1期、S期、G2期細胞的百分比數(shù)據(jù)，以及G1期和G2